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步骤 | 实验内容 | 实验时间 | 备注 |
---|---|---|---|
1 | 重组酵母表达质粒构建 | 2 周 | 可选择不同载体;不同亲和标签;分泌或胞内表达 |
2 | 重组质粒电转化 | 1周 | 不同表达菌株可选, PCR 鉴定5-10个克隆 |
3 | 重组表达子筛选 | 3-4周 | 5-10个克隆筛选, Zeocin抗生素浓度筛选重组子,结合Western blot 方法鉴定重组蛋白表达 |
4 | 小规模蛋白表达和纯化 | 2-4周 | 优化培养基,菌体密度,甲醇浓度,诱导时间等 |
5 | 大规模蛋白表达和纯化 | 根据表达体积商定 | 可选择摇瓶或者发酵罐培养 |